|
|
|
|
|
 |
مشاهده طرح تحقیقاتی |
 |
|
|
|
| شناسه طرح |
8912240186 |
| کد داخلی |
|
| كد سه حرفی دانشگاه یا سازمان مجری اصلی |
61 |
| نام دانشگاه یا سازمان مجری اصلی |
دانشگاه علوم پزشكي گلستان |
| نام گروه یا دانشكده یا بخش محل اجرای طرح |
مركز تحقيقات بيوشيمي و اختلالات متابوليك |
| عنوان انگلیسی |
Association study of the rs7903146(C/T) and rs12255372(G/T) Polymorphisms of Transcription Factor7-Like2 (TCF7L2) Gene and Type2 Diabetes in T2DM patients referred to clinic of diabetes in Gorgan |
| عنوان فارسی |
بررسي همراهي پلي مورفيسم هايrs7903146(C/T) وrs12255372(G/T)
ژن TCF7-L2 با ديابت نوع2 دربيماران مراجعه كننده به كلينيك ديابت شهرستان گرگان |
| خلاصه طرح به فارسی |
تيپ 2 ديابت مليتوس بعنوان يك بيماري ناهمگن با درجات متفاوت مقاومت (عدم پاسخ سلول ها نسبت به انسولين)و نقص ترشح انسولين مشخص مي شود كه هر دوي اينها نتيجه ي برهمكنش فاكتورهاي ژنتيكي و محيطي است[1] .
بيشتر ژن هاي كانديد درگير T2DM يك تاثير نسبتاً كم در اين بيماري نشان داده اند[2] .اگرچه طبق گزارش Grant et al. و طي بررسي آنها روي جمعيت هايي از ايسلند دانمارك و ايالات متحده واريانت هاي ژن TCF7L2 ارتباط قوي با خطر T2DMنشان دادند[3] . شواهد نشان مي دهد كه ژن TCF7L2 مهمترين ژن مستعد به ديابت در جمعيت هاي اروپايي است كه تاكنون شناخته شده است . هر كپي از الل مستعد اين ژن خطر ديابت را 1.5-1.4 برابر افزايش مي دهد[4] . احتمالاً ژن TCF7L2 با تاثير روي ترشح انسولين در خطر ديابت موثر است[5] . طبق گزارش Florez et al. SNP هاي rs12255372 وrs7903146 از اين ژن ارتباط قوي با خطر T2DM دارند .[6]الل هاي خطر اين ژن با نقص عملكرد بتا سلول هاي پانكراس در افراد مبتلا به T2DM و افراد سالم همراه هستند[7]. در سطح فردي حمل الل خطر TCF7L2 خطر T2DM را تا 50% افزايش ميدهد و در سطح جمعيت خطر نسبي كمتر از 25% و متنوع با فراواني الل است[8]. طبق گزارش Grant et al. الل هاي خطر اين ژن با تغيير سطح هورمون GLP-1 روي ترشح انسولين در بتا سلول هاي پانكراس تاثير مي گذارند.[3]
اين يافته ها در جمعيت ها و قوميت هاي متفاوت در سراسر جهان تكرار شد. تعدادي از اين مطالعات مشاهده كردندكه بين اين واريانت هاي ژنTCF7L2 و تعدادي از ويژگي هاي سندروم متابوليكي ارتباط وجود دارد[1]. تاكنون بررسي فراواني SNP هاي rs12255372 و rs7903146 از ژن TCF7L2 در كشور ما انجام نشده است لذا هدف اين مطالعه بررسي فراواني اينSNP ها و ارتباط آنها با بروز T2DM در يك جمعيت از استان گلستان است . |
| واژههای کلیدی به فارسی |
پلي مورفيسم -TCF7-L2 -ديابت نوع2 |
| تاریخ تصویب |
1389/12/24 |
| مدت زمان اجرا به ماه (مصوب) |
22 |
| ضرورت اجرای طرح |
بروز T2DM رو به افزايش است. در حال حاضر تخمين زده شده است كه بيش از 190 ميليون فرد مبتلا به اين بيماري در سراسر جهان وجود دارد. پيش بيني مي شود تا سال 2025 اين عدد به 330 ميليون و تا سال 2030 به 366 ميليون فرد مبتلا برسد و متاسفانه 77.6% افراد مبتلا به T2DM تا سال 2030 مربوط به كشورهاي در حال توسعه خواهد بود[11].
T2DM از برهم كنش پيچيده ي عوامل ژنتيكي و محيطي، اجتماعي، شيوه ي زندگي ايجاد مي شود. ژن هاي متعددي در فيزيوپاتولوژي اين بيماري درگير هستند.تاكنون بررسي فراواني SNP هاي rs12255372 و rs7903146 از ژن TCF7L2 در كشور ما انجام نشده است لذا هدف اين مطالعه بررسي فراواني اينSNP ها و ارتباط آنها با بروز T2DM در يك جمعيت از استان گلستان است . |
| اهداف اجرای طرح |
1. تعيين فراواني نسبي آللهاي پلي مورفيسم هاي C/T))rs7903146 و 12255372(G/T) rs ژن TCF7-L2 درجامعه ديابتيك مراجعه كننده به كلينيك ديابت شهرستان گرگان
2. تعيين فراواني نسبي آللهاي پلي مورفيسم هاي C/T))rs7903146 و 12255372(G/T) rs ژن TCF7-L2 درجامعه كنترل شهرستان گرگان
3. مقايسه فراواني نسبي آللهاي پلي مورفيسم هاي C/T))rs7903146 و 12255372(G/T) rs ژن TCF7-L2 در دو جامعه مذكور |
| روش اجرای طرح |
مطالعه بصورت case-control design و بصورت آزمايشگاهي اجرا خواهد شد. مراحل و روش هاي اجراي طرح به شرح ذيل مي باشد:
1. انتخاب و فراخواني افراد بيمار:
تعداد 254بيمار غير خويشاوند كه اسامي انها در مخزن اطلاعات كلينيك ديابت موجود مي باشد از طريق تلفن تماس و يا مراجعه حضوري به آدرس محل كار و يا سكونت آنها كه در پرونده هايشان موجود است، جهت ارائه نمونه خون به كلينيك ديابت دعوت مي شوند.
اطلاعات اوليه بيماران از قبيل sex , age , BMI در يك پرسشنامه ثبت و جهت رعايت اصول اخلاقي در بالاي هر پرسشنامه كد رهگيري درج مي شود و از اين مرحله به بعد داوطلبين شركت كننده در طرح با كد شناخته مي شوند.
2.انتخاب فراخواني افراد كنترل:
تعداد 250فرد سالم غير خويشاوند از جمعيت عمومي بر اساس ملاكهائي انتخاب ميشوند 1.عدم پيشينه خانوادگي ابتلا به T2DM حداقل در دو نسل قبل 2.آزمون منفي براي glucose tolerance test
اطلاعات اوليه افراد كنترل از قبيل sex , age , BMI در يك پرسشنامه ثبت و جهت رعايت اصول اخلاقي در بالاي هر پرسشنامه كد رهگيري درج مي شود افراد كنترل بايستي از لحاظ سني با افراد بيمار مطابقت داشته باشند.
3.اخذ فرم رضايت نامه از داوطلبين شركت كننده در طرح
فرم رضايت نامه براي شركت در طرح و جهت دادن نمونه خون در اختيار افراد بيمار و كنترل قرار ميگيرد.
4. جمع آوري نمونه خون افراد مبتلا و نيز نمونه افراد كنترل: در اين پژوهش تعداد 250 نفر مبتلا به ديابت نوع2 و تعداد 250 نفراز افراد سالم مورد مطالعه مولكولي قرار خواهند گرفت. پس از توضيح طرح و كسب رضايت نامه كتبي از بيماران وافراد سالم، 10 سي سي خون محيطي از افراد گرفته ميشود و در لوله هاي حاوي ضد انعقاد (EDTA)كه از قبل كد گذاري شده اند قرار ميگيرد و تا زمان تخليص DNA در دماي 20 – درجه نگهداري مي گردداستخراج DNA نمونه هاي دريافت شده با روش كيت استخراج DNA و طبق دستورالعمل شركت سازنده كيت انجام ميگيرد.
6.استخراج DNA ژنومي.
استخراج DNA نمونه هاي دريافت شده با روش كيت استخراج DNA و طبق دستورالعمل شركت سازنده كيت انجام مي گيرد.
7. بررسي كيفيت DNA ژنومي استخراج شده.
كيفيت DNA از نظر غلظت و ميزان خلوص در مراحل بعدي آزمايش در كاهش زمان و هزينه هاي اجراي طرح و همچنين صحت نتايج تاثير به سزايي خواهد داشت و لذا قبل از ادامه مراحل آزمايشگاهي كيفيت نمونه هاي استخراج شده با استفاده از دستگاه اسپكتروفتومتري در طول موجهاي 260 و 280 نانومتر بررسي مي شود. استخراج DNA براي نمونه هايي بدون كيفيت مجدداٌ تكرار مي شود.
8. تهيه بانك DNA
50 ميكروليتر از DNA استخراج شده به cryotube منتقل شده و در ركهاي مخصوص در تانك ازت براي مدت بسيار طولاني ذخيره مي شوند.
9.PCR :
با استفاده از تكنيك PCR دو آمپليكون از ژن TCF7L2 كه به ترتيب پلي مورفيسم هاي rs12255372 و rs7903146 را در بر مي گيرد تكثير مي شوند. در مراحل PCR از پرايمرهاي ليست شده در جدول 1 استفاده مي شود. مشخصات پرايمر ها در جدول 2 ارائه شده است.
جدول 1: توالي اوليگونوكلئوتيدي آغازگرها در جهت ´5 به ´3.
نام پرايمر توالي در جهت ´5 به ´3
rs12255372-F 5-CCCAGGAATATCCAGGCAAGGAT -3
rs12255372-R 5-CAAATGGAGGCTGAATCTGGC -3
rs7903146-F 5-TTAGAGAGCTAAGCACTTTTTAGGTA -3
rs7903146-R 5- ACTAAGTTACTTGCCTTCCCTG-3
جدول 2: مشخصات اوليگونوكلئوتيدهاي آغازگر
نام پرايمر مشخصات
rs12255372-F پرايمر هاي forward , reverseبراي تكثير آمپليكوني كه پلي مورفيسم rs12255372(G/T)را در بر مي گيرد و در اين طرح با نام آمليكون 1 ناميده مي شود.
اين آمپليكون واجد جايگاه برش براي آنزيم محدودالاثر BseGlمي باشد(4) .
Rs12255372-R
rs7903146-F پرايمر هاي forward , reverse براي تكثير آمپليكوني كه پلي مورفيسم rs7903146(C/T)را در بر مي گيرد و در اين طرح با نام آمليكون 2 ناميده مي شود.
اين آمپليكون واجد جايگاه برش براي آنزيم محدودالاثر Rsalمي باشد (4).
Rs7903146-R
PCR هر يك از آمپليكونها به صورت مجزا در reaction هايي با حجم نهايي 25 ميكروليتر در دستگاه هاي PCR موجود در محل اجراي طرح set up و اجرا مي شود.
صحت محصولات PCR با استفاده از روش الكتروفورز بر روي ژل آگارز 1.5% در كنار نشانگر مولكولي تاييد مي شود. به منظور تاييد نهايي چند نمونه از محصولات PCR پس از الكتروفورز بر روي ژل با استفاده از كيت DNA extraction kit و مطابق دستورالعمل شركت سازنده خالص سازي شده و سپس تعيين توالي مي گردد. تعيين توالي با استفاده از پرايمر هاي اختصاصي هر يك از آمپليكونها انجام مي گيرد. نتايج تعيين توالي محصولات PCR با داده هاي مربوط به توالي ژن TCF7L2 در G |
| اعتبار طرح |
170062000 |
| محل تأمین اعتبار |
دانشگاه علوم پزشكي گلستان |
| تاریخ عقد قرارداد |
1389/12/24 |
| در راستای اولویتهای دانشگاه |
بلي |
| ارجاع به كمیته اخلاق |
خير |
| وضعیت كنونی طرح |
فعال و منتشر شده |
| مجری اصلی |
4839652295 |
| همکاران |
1000000380--2120887057--2181117993--2093194295--1000000454--1000000392 |
| تاریخ بهروز رسانی |
1390/4/15 |
| داوران طرح |
[hidden] |
| محل اجرای طرح |
مركز تحقيقات بيوشيمي و اختلالات متابوليك |
| دفعات مشاهده |
1093 بار |
|
برگشت به فهرست
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
